Endotoksintesting

Endotoksiner, en type pyrogen, er naturlige forbindelser funnet i den ytre cellemembranen til Gram-negative bakterier og de påvirker over 30 biologiske aktiviteter. Endotoksiner kan føre til celledød ved å initiere komplementaktivering.

I dag utføres endotoksintester på råvarer og i prosessmaterialer, og i validering av produkter i farmasøytisk industri og av medisinsk utstyr. Vår leverandør Lonza har omfattende erfaring med endotoksindeteksjon og regulatoriske krav, og leverer innovative og tidsbesparende verktøy for både farmasøytiske og forsknings-markeder.

Limulus Amebocyte Lysate (LAL) tester

Limulus Amebocyte Lysate (LAL) testen ble kommersielt introdusert på 1970-tallet. LAL lages fra blodceller, eller amebocytter, fra hesteskokrabben (Limulus polyphemus). Frederick Bang og Jack Levin observerte at blodceller fra hesteskokrabber koagulerte i nærvær av endotoksin, og denne teknologien ble brukt i utviklingen av endotoksindeteksjonsanalyser.

Lonza er bransjeledende innen endotoksindeteksjonsprodukter, tjenester og programvare. De har utviklet et integrert system for kvantitativ endotoksindeteksjon hvor hver systemkomponent er validert og kan verifiseres.

To platelesere har blitt validert som en del av deres kvantitative endotoksindeteksjonssystemer. Disse 96-brønns-plateleserne gir jevn temperatur fra brønn til brønn, og begge leserne kan opereres meget brukervennlig via deres WinKQCL-software. 

I tillegg til endotoksintestings kit, instrumenter og software, tilbyr Lonza også ekstrautstyr som man trenger når man skal kjøre disse testingene. 

Tilgjengelig ekstrautstyr:

• Pyrogen-frie rør, sertifisert til å inneholde mindre enn 0.005 EU/ml endotoksin, og er anbefalt som reaksjonsrør i gel clot assays, og til å fortynne endotoksinstandarder og testprøver i. To størrelser er tilgjengelig.  

• Prøvecontainere som kan brukes til å transportere produktprøver for endotoksinanalyse, eller til lagring av prøver

• LAL reagent grade testplater, sertifisert å inneholde mindre enn 0.0005 EU/well endotoksin, og som ikke gir inhibasjon

• Pyrogen-frie pipettespisser, sertifisert å inneholde mindre enn <0.001 EU/ml eller <0.005 EU/ml endotoksin (avhenger av type spisser)

• LAL Reagent Reservoir (#190035: 10 reservoir/pakke) til bruk sammen med multikanalspipetter når man skal tilsette reagenser til en 96-brønnsplate

• LAL Reagent Water. LAL-vann er anbefalt å bruke til oppløsing av LAL reagenser, og til fortynning av kontrollstandard-endotoksin og testprøver. Sertifisert til å inneholde mindre enn 0.005 EU/ml, og sertifisert for positiv produktkontroll (PPC) recovery innen 75 til 150 %. 

• beta-G-blocker (#N190: Glucan blocker, 5 ml/vial). Gir en reduksjon av enhancement forårsaket av beta-D-glukaner

Lonzas Endotoxin Testing Service tilbyr sin ekspertise innen endotoksintesting. De tester med den metoden som passer best for dine prøver, enten gel clot, kinetisk kromogen eller kinetisk turbidimetrisk LAL metoder, eller med rFC fluorescent assayet. 

Testingslaboratoriene ligger i cGMP-sertifiserte avdelinger i Walkersville, MD USA og i Verviers, Belgia. 

All pharmasøytisk gradert endotoksintesting utføres i henhold til regulatoriske dokumenter (U.S og European Pharmacopeia - USP og EP, Bacterial Endotoxins Test (BET), USFDA Guidance for Industry og USP monograph for testing av medisinsk utstyr). 

PyroCell™ MAT System er et meget sensitivt og pålitelig in vitro assay laget for deteksjon av et stort utvalg pyrogener i komplekse formuleringer, som for eksempel humane vaksiner og cellebaserte biologiske stoffer. 

PyroCell^TM Monocyte Activation Test System fordeler

• Pasientsikkerhet - deteksjon av alle pyrogener (både endotoksiner og ikke-endotoksin patogener) i en enkelt test
• Det benyttes ikke forskningsdyr - testen er derfor anerkjent som en erstatning til Rabbit Pyrogen Test
• Human-spesifikk - primære humane celler etterlikner den medfødte humane responsen på pyrogener
• Fleksibel - sikker testing av legemidler og moderne biologiske stoffer
• Sensitiv - Limit of Detection (LOD) ≤ 0.02 EU/mL 
• Standarisert - robuste applikasjons- og assay-kontroller oppfyller behover for høy sensitivitet og pålitelige resultater

PyroCell^TM Monocyte Activation Test (MAT) Assay prinsipp 

PyroCell MAT systemet er et optimalisert reagenskitt laget for sensitiv deteksjon av pyrogener i farmasøytiske preparater. PyroCell MAT kittet består av en cryo-preparasjon av Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC) samlet i like mengder fra fire humane bloddonasjoner, og et optimalisert MAT Culture Medium Supplement. Kittet er validert med Pelikine compact human IL-6 ELISA kit, noe som sikrer riktige resultater. 

PyroCell^TM MAT Assay måler responsen hos det humane immunsystemet. Monocytter som er nøkkelceller i vår medfødte immunitet, responderer på tilstedeværelsen av pyrogener (endotoksiner og ikke-endotoksin pyrogener) ved å skille ut pro-inflammatoriske cytokiner, som kan måles i et ELISA assay. 

Oppsett dag 1:
pMAT cellene tines og inkuberes sammen med produktet eller testprøvene i en overnatts-kultur (18-24 timer) på 37°C i en CO2-inkubator.

Oppsett dag 2:
Supernatantene høstes og cytokinet interleukin-6 (IL-6) som har blitt frigjort av de humane monocyttene detekteres med PeliKine compact human IL-6 ELISA kittet. 

Tilstedeværelsen av IL-6 måles i en absorbans-leser som optisk tetthet (optical density, OD). Ved å bruke endotoksinfortynninger som referanser kan OD-verdiene som avleses omregnes til Endotoxin Equivalent Units (EEU/mL).

• Quick Start Guide
• Instructions for routine use

Prices and ordering

Prices are available in our webshop. You may also contact us by e-mail for price information and ordering.

Rockland tilbyr to endotoksintestingskit - EndoAlert™ Endotoxin Plate Kits - til forskning (research use only (RUO). Begge kittene er kinetisk, kolorimetriske assays for kvantitativ bestemmelse av bakterielt endotoksin i væskeløsninger. De benytter et kromogent Limulus amebocytt lysat (LAL) reagens som reagerer med lipopolysakkarider (LPS), også kalt endotoksiner, fra den ytre membranen hos Gram-negative bakterier. 

Det kromogene LAL reagenset som benyttes i disse kittene måles ved 405 nm, og kittene er kvantitative og mer sensitive enn gel clot-kit. De har et deteksjonsområde fra 0.01 til 10 Endotoksin enheter (EU/ml). 

EndoAlert™ Endotoxin Plate Kit
LAL reagensen i dette kittet løses opp med LAL Reagent Water. Reagensen vil reagere både med LPS (endotoksin) og B-D-glucan (i for eksempel celluloseprøver eller fra soppforurensinger).
Reagenser og utstyr inkludert: 96-brønnsplate, endotoksinstandard, kromogent lysat (60 tester), LAL Reagent Water.

EndoAlert™ ES Endotoxin Plate Kit
LAL reagsen i dette kittet løses opp med Endotoxin Specific Constitution Buffer som inaktiverer og blokkerer faktor G veien (fungal). Faktor C (LPS bindingsprotein) veien forblir intakt noe som gjør assayet endotoksin-spesifikt. Kittet er dermed anbefalt for testing av prøver hvor glukaner er en utfordring. 
Reagenser og utstyr inkludert: 96-brønnsplate, endotoksinstandard, kromogent lysat (60 tester), LAL reagent water, endotoksinspesifikk buffer.

Last ned produktbrosjyre.